一、弓形虫试剂盒用途及检测方法简述

弓形虫病（ToxopLasmosis）由细胞内寄生的刚地弓形虫引起，患者可能由食用污染的肉食或接触含有卵囊的猫粪而得病。病原体可通过胎盘感染胎儿，导致先天性弓形虫病，引起胎儿死亡或畸形。酶联免疫检测弓形虫特异性抗体IgM，是鉴定弓形虫病准确的血清学方法。

把纯化了的弓形虫抗原包被在微孔表面，加入经稀释的患者血清样品，若其中存在弓形虫IgM抗体，它便与包被的抗原结合成为抗原-抗体复合物。用水洗去未结合物后加入底物和显色剂，所产生颜色的强度与样品中的抗体的量成正比。其结果通过酶标仪在平行检测中与临界校正液和对照品相比较而得出。

二、弓形虫试剂盒试剂盒的组成

1.抗原包被的微孔板，1块，96孔；

2.阴性对照：150μL，1瓶（无色盖）；

3.临界校正液：150μL，1瓶（黄色盖）；

4.阳性对照：150μL，1瓶（红色盖）；

5．洗涤浓缩液（20X）：50ml，1瓶；

6．样品稀释液：22ml，1瓶；

7．酶联试剂：12ml，1瓶；

8．TMB试剂：11ml，1瓶；

9．终止液（1N HCL）：11ml，1瓶。

三、弓形虫试剂盒的保存和仪器

1．试剂盒在2-8℃下保存；

2．微孔板保存在有干燥剂的密封袋中；

3．试剂盒在有效期内是稳定的；

4.试剂盒中的试剂在保存或使用期间，应避免暴露在热、阳光和强烈光线之中。

*警示与注意:

1.试剂盒的某些材料中可能含有潜在生物危险的组分,应按微生物学和生物医学实验室有关生物安全的规定进行操作和处理。

2.试剂盒仅用于实验室。

3.勿用嘴吸移液管,禁止在样品和试剂盒试剂操作区吸烟、吃东西。

4.本试剂盒中的各组分是一个完整的单位，不同批号的组分不能混用。

5.本试剂盒试剂中含有防腐剂*，*会与铅、铜形成爆炸性的金属化合物。

处理：用大量水冲洗。

四、弓形虫试剂盒样品的采集和制备

1.采集血样并分离血清。

2.采集的样品在2-8℃下保存7天，冰冻状态下可保存6个月，血清样品要避免反复冻融。

五、弓形虫试剂盒试剂制备

1．使用前使所有试剂恢复至室温（18-25℃，下同）；

2．制备洗涤缓冲液：按1：19的比例稀释洗涤浓缩液（20X），即50ml洗涤浓缩液（20X）用蒸馏水或去离子水稀释至1000ml，已稀释好的洗涤液在2-8℃下可保存一个月，用前混匀。

六、弓形虫试剂盒检测步骤

1．将所需微孔安全地放在支架上，建议：阴性对照、阳性对照、待检样品和临界校正液按双孔设置；

2．按1：40稀释待测样品、阴性对照、阳性对照和临界校正液。方法是将5μl上述样品分别加入到200μl样品稀释液中，充分混匀；

3．精密吸取100μl稀释的血清样品、临界校正液和对照品加入相应的微孔中；取100μl样品稀释液加入到1A位置的微孔内，作为空白对照；轻敲微孔板，去除液体中的气泡；

4．37℃下温育30分钟；

5．温育完毕，把全部微孔中的液体清除干净后，用稀释的洗涤缓冲液（1X）冲洗5次；

6．向每个微孔中加入100μl酶联试剂，轻轻混合10秒钟；

7．37℃下温育30分钟；

8．甩干每个微孔中的酶联试剂，用稀释的洗涤

缓冲液（1X）冲洗5次；

9．向每个微孔中加入100μlTMB试剂，轻轻混合10秒钟；

10．37℃下温育15分钟；

11．向每个微孔中加入100μl终止液终止反应；

12．轻轻混合30秒钟，此步确保所有蓝色全部转为黄色至关重要；

13．用酶标仅在450nm处于15分钟内读出光密度值。