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人胰岛素检测试剂盒样品收集

2018-05-28 浏览次数：1869

人胰岛素检测试剂盒采用双抗体夹心法：抗人胰岛素(INS)单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的胰岛素(INS)会与单抗结合，游离的成份被洗去。加入酶标抗体，抗人胰岛素(INS)抗体与结合在单抗上的人胰岛素(INS)结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，若反应孔中有胰岛素(INS)，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在450nm处测OD值，胰岛素(INS)浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的胰岛素(INS)浓度。

人胰岛素检测试剂盒样品收集:

1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会

影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。

8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品zui高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。

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