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骨保护素试剂盒说明书
2020-10-09 浏览次数：1638
一.骨保护素试剂盒产品介绍：
骨保护素(OPG)或破骨细胞抑制因子(OCIF)是肿瘤坏死因子受体群 11b 的糖蛋白，是有 380 个氨基 酸分子的合成单体， 在细胞内组合为二聚物，主要 以二硫键链接二聚物形式分泌到细胞外腔。骨保护素由包括成骨细胞在内的细胞和不同组织生成。骨保护素是通过 RANKL 诱饵受体对骨吸收进行负调控， 这样就中和了 RANKL 在破骨细胞生成的作用。骨保护素也参与血管钙化的调控。
二.骨保护素试剂盒应用范围：
1.骨质疏松（1,2）
2.局部吸收活性增加的疾病（3-6）
3. 关节炎（7,8）
4.治疗监控（9-11）
5.心血管疾病（12-17）
三.骨保护素试剂盒检测步骤：
所有试剂和样本在实验前要平衡至室温 （18-24℃）。 标记好 STD/SAMPLE/CTRL（标准品/样本/质控品） 的位置。 从铝箔袋中取出所需数量的微孔板条。将不使 用的微孔板条放回带有干燥剂的铝箔袋在 4℃ (2-8℃)保存，可稳定至标签所标日期。
1）取 ASY 稀释液（红盖）150µl 加入到每孔内 2）校准品/质控品/样本各取 20µl 分别加入到相应孔 内（复孔操作），并轻轻晃动 3） 每孔内加入50µl 抗体（生物素标记OPG抗体， 绿盖），并轻轻晃动 4）遮盖微孔板室温（18-24℃）下孵育 4 小时 5）用 300µl 稀释洗液反复洗板 5 次，后一次清洗 后，于吸水纸上强拍微孔板以除去残留的洗液 6）加入结合物（棕盖）200µl 至每孔内 7）遮盖微孔板室温（18-24℃）下孵育 1 小时 8）用 300µl 稀释洗液反复洗板 5 次，后一次清洗 后，于吸水纸上强拍微孔板以除去残留的洗液 9）加入 TMB 底物（蓝盖）200µl 至每孔内 10）室温（18-24℃）下避光孵育 30 分钟 11）加入终止液（白盖）50µl 至每孔内并轻轻晃动 12）以 450nm 波长（630nm 参考值）立即测定吸 光度
四.骨保护素试剂盒检测原理：
本试剂盒采用夹心 ELISA 检测人血清和血浆中 的骨保护素。添加缓冲液，标准品/样本/ 质控品，将检测的抗体（小鼠抗人生物素标记 OPG 单克隆抗体）移到预包被羊抗 OPG 多克隆抗体微量 滴定条中，标准品/样本/质控品中的 OPG 与微孔中 预包被的抗体结合，与要检测的抗体形成夹心层。 清洗所有非特异性未结合的物质。第二步，结合物
（链霉亲和素-HRPO）加入微孔板中，与检测抗体反 应。再次清洗后，将 TMB 底物加到微孔板中。酶催 化的底物颜色变化与 OPG 数量呈比例。用酶标仪可 以检测到颜色变化。用标准品中获得的值，生成吸 光度（450nm）与标准浓度的剂量反应的曲线。OPG 浓度直接从剂量曲线上获得。
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