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介绍粪便钙卫蛋白试剂盒的操作步骤

2019-05-20 浏览次数：2364

粪便钙卫蛋白是诊断肠炎疾病严重性的一个指标，肠炎性疾病（IBD）患者的粪便钙卫蛋白浓度高，其疾病复发的风险增大。低粪便钙卫蛋白浓度与肠的同种异体移植排斥的低风险相关。该检测使用特异性单克隆抗体，确保测试只检测到钙卫蛋白。因此粪便钙卫蛋白试剂盒是比不可少的。

粪便钙卫蛋白试剂盒的操作步骤主要分为FC测定抽提步骤和ELISA步骤：

一、FC测定抽提步骤：

1、将空的15ml聚丙烯试管连同接种环一起称重，将精密天平归零。

2、冷冻粪便在室温下解冻后，用接种环挑取50~100mg粪便，准确称重。

3、按粪便重量(mg):抽提缓冲液体积(ml)=1:49的比例加入抽提缓冲液，盖上试管。

4、在涡旋振荡器上涡旋5分钟，直至混匀。

5、将混匀的液体移入2ml离心管，高速离心5分钟。

6、将上清液移入标记好的试管中。

二、ELISA步骤：检测前将试剂平衡至室温

1、用孵育缓冲液将粪便抽提液按照1:150稀释，充分混匀。

2、将试剂盒中96孔板清洗2遍，甩干。

3、分别吸取100ul稀释后的样本，标准品及质控品以此类推。

4、用封膜封板，置于水平摇床，18~28°C孵育30分钟。300转/分钟。

5、清洗5遍.

6、每孔均加入100ul酶标液。

7、用封膜封板，置于水平摇床上，18~28°C孵育30±5分钟。300转/分钟。

8、清洗5遍，甩干。

9、每孔均加入100ulTMB底物液。

10、用封膜封板，置于水平摇床上，避光，18~28°C，孵育15±2分钟。

11、每孔均加入100ul终止液，用吸头除去气泡，30分钟内进行第13步。

12、用酶标仪在450nm处读数。

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